Qual etapa pode ser omitida na coloração de Gram?

A coloração de Gram é um passo muito importante na caracterização e classificação inicial das bactérias. Afinal, esse método de coloração permite que as bactérias sejam visualizadas no microscópio óptico, uma vez que sem a coloração é impossível observá-las ou identificar sua estrutura.

O método de coloração de Gram recebeu esse nome em homenagem ao patologista dinamarquês Hans Christian Joachim Gram que realizou a descoberta em 1884 e, aliás, até hoje continua sendo a mais utilizada nos laboratórios de análises clínicas e microbiologia. Através da coloração é possível identificar e diferenciar os dois principais grupos de bactérias, sejam Gram-positivas ou Gram-negativas.

Princípio da coloração de Gram

Em suma, o procedimento de coloração de Gram permite que as bactérias retenham a cor com base nas diferenças nas propriedades químicas e físicas da parede celular. De fato, o uso dos corantes permite aumentar o contraste e evidenciar a estrutura bacteriana.

A coloração envolve 3 etapas principais:

• Coloração com violeta de cristal (um corante solúvel em água, roxo);
• A descoloração (utilizando etanol / acetona);
• A contra-coloração (utilizando corante Safranina, vermelho).

Diferença entre bactéria Gram-positiva e Gram-negativa

A princípio, há diferentes graus de permeabilidade na parede dos microrganismos Gram-positivos e Gram-negativos.

As bactérias Gram-positivas retém o cristal violeta devido à presença de uma espessa camada de peptidoglicano (polímero constituído por açúcares e aminoácidos que originam uma espécie de malha na região exterior à membrana celular das bactérias) em suas paredes celulares, apresentando-se na cor roxa.

Já as bactérias Gram-negativas possuem uma parede de peptidoglicano mais fina  que não retém o cristal violeta durante o processo de descoloração e recebem a cor vermelha no processo de coloração final.

Exemplos de bactérias Gram-positivas

Bacillus, Nocardia, Clostridium, Propionibacterium, Actinomyces, Enterococcus, Cornyebacterium, Listria, Lactobacillus, Gardnerella, Mycoplasma, Staphylococcus, Streptomyces, Streptococcus.

Exemplos de bactérias Gram-negativas

Escherichia, Helicobcater, Hemophilus, Neisseria, Klebsiella, Enterobacter, Chlamydia, Pseudomonas, Salmonella, Shigella.

Passo a passo da metodologia de Gram

1.  Cubra o esfregaço com violeta-de-metila e logo após deixe por aproximadamente 15 segundos;
2.  Adicione igual quantidade de água sobre a lâmina coberta com violeta-de-metila e então deixe agir por mais 45 segundos;
3.  Escorra o corante e lave em um filete de água corrente; Cubra a lâmina com lugol diluído (1/20) e deixe agir por aproximadamente 1 minuto;
4.  Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente;
5.  Adicione álcool etílico (99,5º GL) sobre a lâmina; descorando-a, até que não desprenda mais corante;
6.  Lave em um filete de água corrente;
7.  Cubra a lâmina com safranina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos;
8.  Lave em um filete de água corrente;
9.  Deixe secar ao ar livre, ou seque suavemente com o auxílio de um papel de filtro limpo;
10.  Visualize no microscópio. Logo após leia em objetiva de imersão (100 X).

Aplicação e benefícios da coloração de Gram

De fato a metodologia irá ajudar na identificação de uma infecção bacteriana, determinando qual é o tipo de bactéria. Em outras palavras, a diferenciação das bactérias Gram-negativas e Gram-positivas permite ao médico determinar um tratamento eficaz ao paciente, dessa forma aplicando a terapia adequada em cada caso.

Mesmo que nem todas as bactérias possam ser diferenciadas através da coloração de Gram, com certeza a metodologia tem grande aplicação no diagnóstico clínico e pesquisa biológica.

Produtos para a metodologia de coloração de Gram

Simulação

Por fim, neste site brainpop.com existe um jogo em que você conseguirá simular o passo-a-passo para a realização da coloração de Gram.

Referência

• Ministério da Saúde. Técnica de Coloração de GRAM

Qual das etapas da coloração de Gram poderia ser omitida e mesmo assim ser possível identificar o resultado por quê?

O que pode dar errado na coloração de Gram?

Quais são as etapas para uma correta coloração de Gram?

Quando pode ocorrer falso resultado na coloração de Gram?